早期玻尿酸主要从动物组织中分离纯化，鸡冠因含量较高成为常用原料。将鸡冠组织经过粉碎、酶解、过滤等多道工序后，可提取出透明质酸粗品，再通过纯化获得医用级玻尿酸。牛眼玻璃体也曾作为提取来源，但因原料稀缺和潜在病原体风险，现已较少使用。动物提取法存在产量低、成本高、可能携带动物源病毒等缺点，目前主要用于实验室研究或特殊用途。
现代工业生产主要采用微生物发酵技术，以马链球菌或兽疫链球菌为菌种，在发酵罐中培养后分泌透明质酸。通过灭活菌体、去除蛋白质、酒精沉淀等步骤获得高纯度产品。发酵法具有产量大、成本低、无动物源污染风险等优势，适合规模化生产。根据分子量差异，发酵法可制备出适用于眼科手术、关节炎治疗或美容填充等不同用途的玻尿酸产品。
使用玻尿酸产品时需注意选择正规渠道，避免来源不明的注射制剂。对禽类蛋白过敏者应谨慎使用动物提取的玻尿酸，注射后出现红肿热痛需及时就医。日常可通过食用富含维生素C的食物促进体内透明质酸合成，但口服玻尿酸补充剂吸收率有限，不能替代医疗用途。
